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电子显微硬度计物理固定一般采用低温冷冻使之由液态变固态 取样与固定 个遇到的问题是取样。首先要注意研究对象的空间和时间位置。比如，想研究花粉发育，就要分期采取从幼小到成熟的花药；想研究受精，就要估计受精过程的大致时间范围，在此期间分批采取子房与胚珠样品。有些植物的受精过程较长，有数天至数月之久，取样可以按小时或天数计；有些植物的受精过程短促到数小时内即已完成，那就必须按分钟计，分批取样，才能捕捉受精的各个瞬间。 采集的样品是新鲜的生活材料，如欲观察其中的生活状态，必须设法直接观察，但更经常的做法是对样品施行化学的或物理学的处理，使之尽可能保持当时的上海金相镶嵌机状态，这叫“固定” (fixation)。固定的作用可以用煮鸡蛋或腌制皮蛋来比喻：鲜蛋是溶胶状态的，不能用刀切；煮熟或腌制后变成凝胶状态，便可以切片了。化学固定使用各种固定剂，如光镜观察中常用的酒精、醋酸、福尔马林以及上述药品的种种混合配方，电镜观察中的戊二醛、锇酸等。不过，经过化学固定，上海金相镶嵌机已被杀死，结构会发生改变，不可能完全保存生活时的原貌，所以观察结果只能获得近似值。物理固定一般采用低温冷冻，使材料由液态变为固态，犹如豆腐变成冻豆腐那样，也可以保存和切片。这种固定方法的大优点是能保存那些化学固定剂保存得不够理想的活性蛋白质(如酶)，因此在免疫上海金相镶嵌机化学研究上大派用场，甚至是不可或缺的手段。这是因为，免疫上海金相镶嵌机化学的研究目标是上海金相镶嵌机内特定的抗原(主要是蛋白质分子)，要通过抗原一抗体反应来对它们进行定位，而抗原很容易在化学固定中遭到不同程度的破坏和流失，从而导致假象。而快速冰冻则可大大减少这方面的损失。
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