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动物上海金相镶嵌机培养中使用的载体-生物学图像维氏硬度计哺乳动物上海金相镶嵌机 当蛋白质产品必须具有绝对的真实性时(即生物加工的蛋白质产品和天然提取的产品完全一样)，我们选择哺乳动物上海金相镶嵌机培养。真实性意味着不仅所有的氨基酸要有正确的排列顺序，而且在培养上海金相镶嵌机中的所有翻译后修饰过程要和在完整的动物体中的翻译后修饰过程相同。在一些情况下，培养的上海金相镶嵌机进行的翻译后修饰可能和这些上海金相镶嵌机在动物体内时不一样。但是对于生物反应器的加工过程来说，哺乳动物上海金相镶嵌机的组织培养将尽可能提供类似于天然产物的产品。哺乳动物上海金相镶嵌机培养系统的另一个优点是大多数具有商业价值的蛋白质都很容易被上海金相镶嵌机排泄出来。 缓慢的生长、昂贵的培养基以及较低的蛋白质表达水平，这些都使得哺乳动物上海金相镶嵌机的组织培养非常昂贵。但是基于哺乳动物上海金相镶嵌机培养的加工过程仍然是非常昂贵的。 目前已经利用了几种作为宿主的上海金相镶嵌机系来生产重组蛋白质(利用重组DNA)。常用的宿主可能是CHO(中国仓鼠卵母上海金相镶嵌机，chinese hamster ovary)上海金相镶嵌机系。 除了生产成本之外，哺乳动物上海金相镶嵌机还面临着其他苛刻的限制。来自于动物的普通上海金相镶嵌机仅能分裂几次，这些上海金相镶嵌机系非常容易死亡。一些上海金相镶嵌机是不易死亡的或连续的，它们能够像细菌一样连续不停地分裂。连续上海金相镶嵌机系是转化上海金相镶嵌机。癌上海金相镶嵌机也是转化上海金相镶嵌机(即失去抑制上海金相镶嵌机复制的能力)。由于在理论上存在着刺激癌上海金相镶嵌机形成的物质可能被掺人目标产物中的可能，因此产品的纯化过程必须极为小心谨慎。除掉产品中的核酸是尤为重要的。此外，应用转化上海金相镶嵌机时需要谨慎，以确保工人的安全。 ． 另外，通常在哺乳动物上海金相镶嵌机培养中使用的载体来自于灵长类的病毒。这种载体可能回复成对人类致病的形式，这是一个令人担心的问题。 大多数载体都不能在普通的宿主上海金相镶嵌机中实现目标蛋白的高水平表达(通常少于总蛋白的5％)。但是，通过基因拷贝数的扩增可以达到较高的表达水平(例如，大于100mg／L的活性分泌性蛋白质)。可能需要花费6个月的时间才能使一种CHO上海金相镶嵌机系达到稳定的高水平的表达。当利用杂交瘤上海金相镶嵌机生产单克隆抗体时，通常比较容易获得较高的效价(或产物浓度)。 任何系统的放大生产都可能改变蛋白质产品的质量，这个问题对动物上海金相镶嵌机培养尤其重要。这种问题部分归因于下列事实：即采用动物上海金相镶嵌机培养主要是因为蛋白质产品的真实可靠性是重点的考虑因素。由于培养条件(剪切力、葡萄糖、氨基糖、DO等)随放大而改变，上海金相镶嵌机对蛋白质的加工效率可能发生变化，改变了翻译后加工的水平。此外，已经表明蛋白质质量可能随其在间歇培养液中的收获时间而变化。这种变化可能是因为胞内加工机器的改变，但通常是因为从死亡上海金相镶嵌机中释放出来了蛋白酶和唾液酸苷酶(siIadase，一种将唾液酸帽子从糖基化蛋白上移除的酶)。过量的蛋白质生产也可能使胞内蛋白质加工上海金相镶嵌机器(即内质网和高尔基体)的加工能力达到饱和，产生了加工不完全的蛋白质。这些问题能对加工生产的策略产生重大影响。一家著名的公司曾被迫提前24h收获产品，以便将专门针对该产品的唾液酸与蛋白质的比率维持在较低的水平。提早收获导致蛋白质浓度损失30％(同延迟收获相比)。 避免这些问题的策略包括降低唾液酸苷酶的生产水平或提高蛋白质加工能力的上海金相镶嵌机系基因操作，或者选择具有这些特点的上海金相镶嵌机系。重新设计培养基可能也是有用的。可以添加抑制不需要的胞外酶活性的化学物，或者添加前体物(例如氨基糖)，来提高加工能力。通过在宿主中添加弱化上海金相镶嵌机凋亡的基因(例如bcl 2)能够减弱上海金相镶嵌机裂解。一种技术上的解决方案是：一旦产品生成，就将其从培养基中移走。例如，可以应用整合了产品捕获步骤的灌注系统。
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