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荧光硬度计在生物学的应用-怎么选择光学仪器 |
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荧光硬度计在生物学的应用-怎么选择光学仪器免疫荧光硬度计免疫荧光显微术是将光学硬度计加以改造以对荧光化合物(fluores-cent compound)所放出的光进行观察。荧光化合物是对某一波长的光[激发波长(excitation wavelength)可以吸收,并发出较长波长[发射波长(emission wavelength)]的光。在荧光显微术中常用的化合物是罗丹明(rhodamine)发射红光;荧光素(fluorescein)发射绿色光。首先,荧光化合物与抗体进行化学偶联,该抗体对观测对象细胞中的特定蛋白质或大分子是特异的。然后将荧光标记的抗体加到组织切片上,或可透光的细胞上,并用激发波长照射标本,在标本中已经结合上抗体的结构即可见到。荧光显微术还可应用于活细胞,它可对细胞和细胞内的结构的运动随着时间进行观察共聚焦显微术共聚焦扫描显微术是标准免疫荧光显微术的改进型,可得到全细胞或较大样本更为清晰的映像。在标准免疫荧光显微术中,化合物发射的荧光来自焦平面(plane of focus)上下两侧的分子,因而使映像模糊不清,难以确定真实的三维分子排列。使用共聚焦扫描硬度计时,只有处于焦平面的分子才发出荧光,这是由于使用了聚焦的激发波长激光束(laser beam).激光束在标本的各个不同部分移动,并在不同深度上透过样木得到一系列映像。然后这些映像经过计算机综合处理,即可得到完整的三维映像。
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