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| 光学硬度计物镜聚光能力小于数字孔径大的物镜 |
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光学硬度计物镜聚光能力小于数字孔径大的物镜 数值孔径（N.A.）小的物镜聚光能力小于数字孔径大的物镜。N.A.对空间分辨率也很重要：N.A.大的透镜比N.A.小的透镜更能分辨标本中的精细结构。放大倍数也很重要：高倍放大物镜（100 x ）的聚光能力弱于60 x或40x 的物镜。 因此用40 x或60 x，N.A.为1.4 的油镜可以获得好的明亮的图像，因为这样镜头能收集绝大部分的光、很好的分辨结构、并能有效地放大并传至检测器、以高对比度成像（lnoue 1986）。 要获得佳效果，还要正确选择盖玻片的厚度，而且观察荧光时，要在盖玻片的正下面，成像时则需标本固定介质的折射率与浸润镜头的介质的折射率（常为1.5 ）相匹配。要对含有水的标本成像，则需要一种特殊的水浸润镜头 倒置硬度计的光路。光线从光源（如水银灯或氙灯）发出后，特定波长的光线通过一个激发光滤光器，以激发特定的荧光染料。光线然后到达二色光束分裂器，使得短波长的光反射至标本。波长较长的发射光却通过光束分裂器。 发射光滤光器将所有来自激发光滤光器的光线减弱，却能让标本发射的任何荧光有效地通过。发射光的波长总是比激发光的波长大。插图：DAPI波光器的透光曲线。 点线表示激发光带通滤光器，实线表示光束分裂器，短条线表示发射光带通滤光器
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