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| 普通荧光硬度计分辨率常识-带图像分析软件 |
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普通荧光硬度计分辨率常识-带图像分析软件传统的荧光显微技术 在荧光显微技术中，光谱由特定波长的光产生。荧光硬度计可使未混有激发光的发射光的透射大化，激发光的强度比发射光大得多。传统的荧光硬度计开始只用于固定的细胞。 检测荧光在活细胞内分布的照相技术由于感光乳剂对低水平光的敏感性低而严重受限，这样，长时间曝光导致暂时清晰度较低，并可能造成对细胞的光力学损伤和细胞运动伪迹。将荧光显微技术与视频图像处理系统结合，克服了这些困难，扩展了用荧光技术探测活细胞的使用范围。由于视频的速度和敏感性较高，可以实时观测并记录荧光强度和分布的快速变化。 传统荧光硬度计技术有一个缺点是产生视野深度很小的图像。由于光学硬度计的分辨度是0.2 μm ，在2~3 um厚的焦距范围内添加这么小的图像会使结构显得模糊。对于超过10μm 厚的样品，焦距以外来的光也能使图像衰变，在所研究的结构周围产生一个弥散的晕轮。焦距外荧光降低了对比度和清晰度。结合使用差异干涉相差显微技术和超低光水平敏感视频检测仪使人们能较长时间在活细胞内观测荧光，而光力学损伤和染料漂白都达到低，且能提高清晰度。但是，去除焦距外荧光的好途径是用共聚焦显微技术。
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