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| 酶大分子常会有好几个溶解度小点-衍射分析 |
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酶这样的大分子常会有好几个溶解度小点 酶的x射线结晶分析学 x—射线结晶分析学是用x射线衍射手段研究分子在晶体中的三维结构。一个酶结晶的晶体格子中，各个原子排列非常规则，原子周围的电子云经x射线照射后会发生散射，其散射强度将随电子云的密度增加而增加，亦即随原子序数的不同而有变化。这些散射的结果如果收集在底片或磁带上，经过测量和电子计算机的运算，即可算出整个酶分子的三维结构。 结晶的培养 x射线衍射分析需要先培养出体积肥大、形状适当的单晶。以现有的x射线衍射技术，晶体每个方向的厚度不得少于0．2mm。晶形良好但过于细长或扁平的晶体并不适用。 像酶这样的大分子在溶剂中相互间的作用非常复杂，有时甚至难以理解，无法描述。但是结晶的基本原则是怎样能使纯酶的溶液慢慢地达到溶解度小的状态，从而诱导酶分子在稍过饱和的溶液中，进入晶体格子的适当位置，使分子相互间发生有利的作用，遂从溶液中结晶出来。 像酶这样的大分子常会有好几个溶解度小点，随大分子本身的浓度，缓冲液的性质及浓度、pH、温度等因素而定。这可由某些蛋白质会有多晶形同时存在的事实得到证明。而每当我们找到了这样的条件，就可以在酶溶液中加入适量的沉淀剂，使酶结晶出来。为了确保能得到晶形完好的单晶，必须配合各种蛋白质的浓 度，缓冲液的性质，沉淀剂的种类及用量、pH、温度等，以达到适当的沉淀点。因为涉及的条件太多，譬如pH，有时能不能够得到好的单晶，相差只在0．1上下，所以初尚有一些原则可循，到了后来，简直是在黑暗里摸索了。有时常要作过几千个试验，才能找到培养酶单晶的好条件。 又酶分子是柔性的，在溶液中其构象会随环境的变迁而改变，呈不断的运动状态。如何能够使这样的酶分子变得比较稳定，不那么柔软好动，亦即使全体分子更为均质化，以利于晶体的生长，非常难以解决。通常都是加入适当的小分子配体，如经过修饰的底物、辅酶及竞争性抑制剂等。也可以试将酶分子本身加以修饰，以达到目的。 一般都先用悬滴蒸汽扩散法(Hangingdropvapordiffusion)宋搜寻这个能进行结晶的试点。
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