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| 测量总蛋白质检测和分析-分光光度法测量 |
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测量总蛋白质检测和分析-分光光度法测量蛋白质的检测和分析 在蛋白质纯化过程中，需要进行两种测量，好对每个组分都进行测量。必须测量总蛋白质和目的蛋白的量(通常是测量生物学活性)。大多数常用分析方法的。没有一种确定蛋白质是否存在的方法，就不可能分离蛋白质，因此，必须要有一种分析方法(定量的或至少半定量的)来确定哪种组分中含有大多数的目的蛋白。 有的分析方法方便、快捷(如酶活性的即时分光光度法测量)，有的则是既耗时又繁琐的生物学分析。后者可能需要几天才能出结果，而且这种情况很棘手，因为当知道了蛋白质在哪个组分时，蛋白质可能由于降解或失活已经丢失，而且，这种丢失直到下一步完成并对其产物进行分析后才能清楚。因此，任何快速的分析方法都具有优势，尽管往往会由于加快了分析速度而降低了准确性。 测量总蛋白质很有用，因为这可以表明每一步的纯化程度，但除非下一步特别依赖于有多少蛋白质存在，否则总蛋白质测量也并不是十分重要，可以留出一个小样品，当纯化完成后再进行测量。然而，知道终产物(假设是纯样品)中有多少蛋白质则十分重要，因为据此可以计算比活(如果该蛋白质有活性的话)，并可与其他制备物的比活进行比较。通常的目标是获得尽可能高的比活(考虑到回收率)，这意味着要保留尽可能多的目的蛋白，而后总蛋白质的量则越少越好。蛋白质分离和纯化方法 蛋白质纯化的现有方法范围很广，从简单的沉淀(从19世纪就开始使用)到复杂的层析和亲和技术，后者不断地得到发展和改进。方法可被分成几种不同的类别(或许好的一种是基于正在研究的蛋白质的特性)，如根据蛋白质的特点，可以将方法分成明显不同但又相互关联的4组：表面特征、结构、净电荷和生物学特性。
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