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| 荧光成像技术即荧光斑点硬度计术(FSM)的应用 |
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荧光成像技术即荧光斑点硬度计术(FSM)的应用 一种荧光成像技术，即荧光斑点硬度计术(FSM)，该技术用于观察肌动蛋白与微管蛋白等细胞内蛋白复合物的动力学、运转及更新。该技术原理在于向大分子结构内注射入低浓度的荧光亚单位，它与未被荧光标记的内源性亚单位共同装备蛋白质，这样就可在分辨率有限的荧光图像中观察到感兴趣的结构内的荧光斑点排布。荧光斑点排布的改变可用于定量分析结构的组装、拆解及运动。与传统的荧光成像技术相比，该技术大大减少了离焦荧光，所以荧光标记结构的荧光斑点大大增强了。此外，与仅可检测小范围标记部分的光敏化和光漂白技术相比，FSM则可检测整个细胞内的蛋白质动力学。作为该技术有用性的例证，采用FSM技术研究活细胞内微管蛋白与肌动蛋白细胞骨架的动态变化的方法，并详述了荧光标记微管蛋白与肌动蛋白的方法及延时成像技术。 近年来，以水母(Aequoria victoria)的绿色荧光蛋白作为探针来研究活细胞甚至活体内的特定蛋白质的技术在逐步发展。绿色荧光蛋白(GFP)及其基因变异体，并举例说明如何用GFP来研究活细胞内特定的GFP融合蛋白的定位及迁移。 光学硬度计的校准及调节 本单元讲述经典的研究型复合光学硬度计以透射及反射照明成像模式工作时校准与调节的方法，而这两种成像模式是该硬度计在生物医学研究领域的常用模式。透射光模式包括亮视场和相差，而反射照明的主要模式为荧光硬度计术。
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