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| 硬度计下凝胶特征-琼脂糖是从海藻中提取多糖 |
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凝胶的特征-琼脂糖是从海藻中提取的多糖电泳法分离核酸 电泳法在分离和纯化生物大分子方面应用广泛，尤其是蛋白质和核酸方面的应用。这些带电物质的分离，是因为在直流电场下它们在缓冲液中具有不同的迁移速率。由于核酸分子的磷酸骨架带有负电荷，所以在电泳过程中核酸会向正极移动；另外蛋白质为两性物质，根据其带电性质可确定其迁移方向。 凝胶电泳法提纯核酸 凝胶电泳可通过DNA的大小将其分离二凝胶中加入DNA片段后在凝胶两端施加电位，因为DNA分子带负电，它会向正极移动；而受到凝胶基质的阻碍，较大的片段移动减慢，较小的片段则移动较快。带有阻力的凝胶相当于分子筛，从而依据片段大小将其分离，大分子迁移率取决于凝胶聚合强度、分子大小和形状以及缓冲液的离子强度和温度。染色后，分离的大分子会在凝胶上显示为从一端到另一端的一系列条带。 凝胶电泳分离法常用的琼脂糖凝胶电泳．带眼井的凝胶薄板可以作为样品的载体，它浸没在一定pH值和离子强度的缓冲液中。用染色剂(如5μm／mL EB)进行染色，可通过观察荧光来检测DNA。电泳后向DNA样本中加入载体染料，相当于将DNA标记；染料中也含有甘油和蔗糖，可将提高样本的密度，使其沉淀到凝胶的井底?常用的两种凝胶为琼脂糖和聚丙烯酰胺。凝胶的特性 琼脂糖是一种从海藻中提取的平均分子量为12000的线性多糖，它由琼脂的重复单位组成，由半乳糖和3，6一葡萄糖分子交替构成。琼脂糖所用的浓度一般在0．5％～3％之间、琼脂糖凝胶是将粉末状的琼脂糖凝胶溶解于缓冲液中煮沸后形成无色溶液，冷却后倒出形成凝胶块，琼脂糖凝胶块易碎，操作时应小心，避免其被破坏二琼脂糖浓度越高，凝胶块就越硬，形成的孔径就越小。大分子的电泳迁移率与其能通过孔径的体积分数成正比。加入适当浓度的琼脂糖，施加合适的电场，可分离长度在200～50000bp范围内的DNA片段；应用脉冲场凝胶电泳(电泳槽中电流方向周期性变化)可以分离50000～5000000bp的超大片段核酸。琼脂糖凝胶电泳比聚丙烯酰胺凝胶电泳速度快，然而前者因为孔径较大，所以分离能力较后者低．在一定的琼脂糖浓度下，待检测的DNA片段迁移率与DNA片段长度(bp)的对数呈线性关系
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