荧光硬度计实验总结

用哪种固定方法 一般认为有两种：冷acetone和4％PFA
我两种都用过，感觉用4%PFA做前固定过夜后糖脱水效果是好的，但是有点费时费力，经过比较，用冷acetone做后固定 5分钟4摄氏度的效果也说得过去，也很方便省时。比较推荐！

blocking solution的配制和时间 我用的是5%serum 1％BSA 0.05%Tween PBS 室温染色盒内1个小时，如果不放心可以两个小时，但是一旦blocking了就要注意不能让切片干燥，所以个人认为一个小时应该够用了。(serum注意是和二抗同一种属）

blocking solution的使用量 我用的是每一张100μl

切忌保持湿度 染色开始后切忌不能让片子干燥了，一旦干燥了就会很糟糕，我也在这个地方吃了很多亏。。。
一抗的名称 使用浓度 染色时间 保持湿度 遮光否
二抗的名称 使用浓度 染色时间 保持湿度 遮光否

洗净方法 一抗之后我一般洗三次 5分钟换一次PBS 4摄氏度
二抗之后我一般洗四次 5分钟换一次PBS 4摄氏度

＃封片剂干燥时间 好是30分钟以上，干燥后马上观察效果公认是好的

＃荧光硬度计的使用 建议一定要跟着老师，前辈，多观摩几次之后再自己动手

简单罗列了几个个人认为需要提前做好提纲的关键词
刚开始做的时候有挺多困难的
慢慢摸索也许会比较辛苦
但是一旦量变到质变之后再加上反复回头看反复总结经验，就会有提高

后附上一张刚做的感觉还算清楚的大肠炎模型的切片中
colonic patch的部位， DC和Tcell 聚集的地方应该是在antigen presenting
蓝色 上皮细胞
绿色 DC
红色 T cell