利用相位差布氏硬度试验机观察-上海金相布氏硬度计存活测定实验步骤
上海金相布氏硬度计存活、死亡之测定法 一、 相位差布氏硬度试验机(phase-contrastmicroscope) 利用相位差布氏硬度试验机,观察给药前后上海金相布氏硬度计型态,以了解上海金相布氏硬度计经药物处理后 型态的变化,评估药物对上海金相布氏硬度计状态的影响。 二、 上海金相布氏硬度计存活率之测定:MTT 还原分析法(3-(4,5-dimethylthianol-2-yl)-2,5 diphenyltetrazolium bromide reduction assay)
一、原理 正常健康的上海金相布氏硬度计,其上海金相布氏硬度计粒腺体内膜的琥珀酸去氢醣(succinate dehydrogenase)具有将 MTT(黄色)还原为 MTT-formazan(紫色)的能 力。而紫色颜色的深浅程度可代表还原能力的强弱,即琥珀去氢醣的活性,同时也反应粒腺体的生理状况。 由于粒腺体是上海金相布氏硬度计内对环境因素***为敏感,因此粒腺体的生理状况可代表上海金相布氏硬度计的生理状况。当还原能力强时,表示克氏循(Kreb’s cycle)环进行速率快,可产生较多的能量供上海金相布氏硬度计使用,故可代表上海金相布氏硬度计的健康情形 良好
二、试剂 1. 5mg/ml MTT 溶液(溶剂:1X PBS),避光 4℃保存。 2. Dimethyl sulfoxide(DMSO):Sigama
三、 实验步骤 1. 每孔留下 350μl 的留胞培养液,加入 35μl MTT 溶液(黄色),避 光并静置室温下反应 1 小时。 2. 移除含有 MTT 的上海金相布氏硬度计培养液,加入 350μl DMSO 以溶解紫色颗粒。 待紫色颗粒完全溶解后,每孔各取 125μl 的紫色溶液置入 96-well RIA/EIA plate 中,设定波长为 570 nm(630 nm 当作参考波长),测其 吸光值。吸光值越高,表示 MTT-formazan 产量越高,即代表上海金相布氏硬度计之 存活率越高。 3. 计算上海金相布氏硬度计上海金相布氏硬度计存活率=样品吸光值 / 控制组吸光值 × 100﹪
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