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| 生物物理工具荧光硬度计技术在细胞生物学应用 |
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生物物理工具荧光硬度计技术在细胞生物学应用 免疫荧光技术不仅可以获得定性和半定量的数据，而几也是一种用来对细胞内某组分进行准确定量的很敏感的方法。无论是从普通硬度计还是从共聚焦硬度计获得的荧光影像均可进行数字化，然后在计算机上用图像分析软件处理。电子图像的获得和分析是一个发展很快的领域，。荧光硬度计技术具有较高灵敏性和专一性，因此是直接由于研究活细胞内特定组分的极难得的生物物理工具。抗体免疫荧光法要求杭体必须能够在其他分子浓度很高时专一地识别抗原分子。在多克隆抗血清中因含有多种不同的抗体，它们可以与同一种抗原的多个抗原决定部位结合，因此，多克隆抗血清虽然通常能很好地染色细胞，但是常常存在着高浓度的非专一性抗体，因此会产生很强的背景。在多数情况下，抗血清的简单滴定使伪信号减低到检测水平以下，从而消除这一问题。抗血清的信号强度是直接地依赖于抗休的浓度并和抗休的亲和常数有关:亲和性越强，有效稀释度越高。如果滴定不足，在使用前，以固定的细胞预吸附抗血清，事实上，稀释数倍后也可以获得较清楚的信号。除此之外另一个常用于多克隆抗体的方法是抗体的免疫亲和纯化，也可以降低非专一性的染色 或者组织培养的上清液和腹水或者两者的混合物都可以使用作为单克隆抗体，由于一般认为单一抗体是在没有竞争的情况下与抗原结合的，因此总的说来使用单抗会增强信号强度，虽然单克隆抗体通常能给出清晰的信号，但是某些单克隆抗体在细胞染色时却不呈反应，这可能是由于下列事实所造成的，即细胞中的特异性抗原决定簇被掩盖了或者是在细胞固定期间被破坏之故。
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