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用来测定分子量-蛋白质的近似分子量技术测定
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用来测定分子量-蛋白质的近似分子量技术测定大小和形状的测定  详细讨论用物理技术来测定酶分子的大小和形状,  找出蛋白质的近似分子量常用的方法之一就是凝胶过滤法。将欲测的蛋白质溶液通过一个装有用交联多聚体制成的小珠状体的柱。小分子(如氨基酸)能够穿透珠状体的细孔,较大的蛋白质分子则不能穿透并直接通过柱,也就是说都被珠状体所斥。一些中等大小的分子比氨基酸较难穿透凝胶珠状体,从而也部分地被排斥掉了  这种技术的详细理论是极其复杂的。不过实际用来测定分子量却是非常简单的。将少量含有已知分子量的或未知分子量的蛋白质浓溶液,从凝胶珠状体柱的顶部加入,凝胶珠状体事先在适当的缓冲溶液中泡胀,并放入柱内使形成一均匀的柱。用缓冲液从柱的顶部冲洗样品,把通过柱流出的液体收集在一个部分收集器中,分段收集器保持每部分的流出液容积尽可能地小。洗脱一种特殊蛋白质所用缓冲液的容积可用分析该蛋白质的各流出部分来测定。将已知分子量的蛋白质洗脱容积,与未知分子量的蛋白质的洗脱容积加以比较,就可以估计出它的分子量,其精确度约为5%。实际上,当用这种技术测定时,发现某些蛋白质具有一种不规则的分子量。这些蛋白质一般是呈纤维状或雪茄状,所以,测得的分子量不能给出一种真正的大小的指征。理论上讲,凝胶过滤法是假设蛋白质是呈球形的,为了进入凝胶珠状体网络时不需要一种特异的排列。显然这种设想对于纤维状分子来说是行不通的,因此测得的分子量是变化不定的。

 


 
 
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