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| 冷冻电子硬度计技术在细胞混合物纯化中应用 |
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冷冻电子硬度计技术在细胞混合物纯化中应用 纯化需要从复杂的混合物中分离出一种蛋白质，混合物通常又来源于细胞裂解物。纯化方案的目的是分离得到无杂蛋白的单一蛋白质并保留它全部或大部分的生物活性。 由于克隆与重组DNA技术的发展使蛋白质可以在外源宿主细胞中大量表达从而给纯化方法提供了很大的帮助。这使在以往不可能被研究的很难分离的蛋白质被研究。 纯化方法是依赖于蛋白质的生物物理性质的，例如，分子质量、电荷、疏水性和流体动力学半径通常被作为分离技术的基础。层析方法形成了蛋白质纯化中常用的制备技术。 在所有的例子中，层析包括流动相(通常是水相)与含有促进与一些蛋白质相互作用的功能基团的惰性支持物(树脂)相互作用。在离子交换色谱中，支持基质包括带负电或正电的基团。根据流体动力学半径(分子排阻层析)、配体结合(亲和层析)和非极性相互作用(HIC和RPC)可以用相似的办法分离蛋白质。 与制备技术一起用的是分析方法，用来确定产物的纯度与分子质量。SDSPAGE在电场作用下仅根据分子质量来分离蛋白质。这种技术在确定亚基分子质量及总蛋白纯度方面被证明有广泛的价值。 在SDS-PAGE技术上扩展的一种方法是蛋白质印迹。这种方法可以通过与特异抗体的相互作用来确定混合物中的抗原蛋白质(该混合物已经是根据大小分离的组分)。 双向电泳可以根据分子质量与总电荷来分离蛋白质。因此，对一种细胞或机体使用这种方法，可以确定单细胞种类的机体或一种细胞中大量不同的蛋白质。 在所有分析方法中，质谱分析技术很重要，因为这种技术可以精确的检测分子离子的核质比。其中常用的方法是MALDI—TOF及电喷雾质谱。用现代的仪器蛋白质的分子质量可以检测到la．m．U．水平。 结合一向和两向凝胶方法，质谱分析被证明在蛋白质组学研究中很有价值。在过去的基因组革命基础上发展起来的蛋白质组学对制备和分析技术有更高的要求。这里讲述的几种方法结合核磁共振、X射线晶体分析法或冷冻电子硬度计技术一起使用，可以在相对短的时间内完成从基因测定到蛋白质结构分析。
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