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双光子荧光硬度计用于荧光细胞中PH定量图像 |
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双光子荧光硬度计用于荧光细胞中PH定量图像双光子荧光硬度计只能用于荧光图像,不能用于明场光透射.分辨率较标准共聚焦低一半.环境要求较高,室温18—22摄氏度,洁净实验室1000级(低颗粒含量),灰尘若多,则易损伤光学镜头.为保证光学稳定性,应采用抗震浮动光学平台,故设备成本高昂,不易普及.全内反射荧光硬度计 很多细胞质变化须在细胞的有限范围内观察,如细胞浆膜.全内反射荧光硬度计提供一种非常接近表面的成像方法.当激发光通过高反射系数的玻璃到低反射系数的细胞,仅观察到超过一定反射角度的反射光。 进入低反射系数细胞的激发光迅速衰减,激发光仅深入到距细胞表面100 nm.因此,仅观察到细胞膜荧光图像.采用TIRFM已获得单个活细胞中细胞膜上单分子图像 用荧光染料Cy3标记人表皮细胞(A431)的表皮生长因子(EGF),EGF是小肽激素,可诱导细胞增殖. 荧光寿命图像硬度计 荧光寿命图像硬度计(FLIM)已用于活细胞中pH定量图像c42),应用于活细胞中酶活性成像.也可以检测活细胞中多种荧光染料如绿色荧光蛋白变异体.FLIM分辨率有限,技术上要求十分严格及复杂的数学处理,对其前景并不看好.
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