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动物细胞不同蔗糖梯度实验图像高倍硬度计
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动物细胞不同蔗糖梯度实验图像高倍硬度计 从胞浆蛋白中分离膜囊泡 实验中常常需要确定蛋白质是定位于胞浆中还是胞膜上,除此以外,在对透化处理的哺乳动物细胞所进行的实验以及有囊泡出芽形成参与的实验中,对膜和胞浆进行分离也常常是很有必要的。将膜与胞浆分离的策略包括使膜透过碘克沙醇阻滞液而从大密度样品中悬浮出来,此策略已扩大用于真核生物和细菌。因为蛋白远比膜的密度大,它不会在梯度中漂浮而是会沉淀,所以此策略可以使二者得到大程度的分离。这种分离方法能避免从蔗糖梯度结果所得出的任何含糊结论,因为在蔗糖梯度中由于沉降作用和扩散作用,膜沉淀和蛋白质会慢速地向同一方向移动。在碘克沙醇溶液中蛋白质与膜囊的密度之间的差异也会比在蔗糖溶液中大更多,主要是由于碘克沙醇梯度具有更低渗透浓度。类似的方法也用于从高密度脂蛋白中分离脂质体。 内吞作用 配体标记 在大多数情况下,对内吞过程所进行的跟踪是通过配体来完成的,配体可以使用放射性标记,可以终通过作用底物而检测的共价结合酶,或者胶体金来进行确定。除非配体自身就很容易被确定,否则对配体所进行的这些修饰可能会改变它的化学行为,但这也是很难避免的。这种方法的基本策略是将这些标记的配体在短时间内注入组织或细胞,之后便可以对配体在不同胞内部件的活动进行跟踪。

 


 
 
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