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一般动物血管等超微结构常用灌注固定-生物硬度计
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一般动物血管等超微结构常用灌注固定-生物硬度计  要想获得良好的精确的酶活性定位,理论上必须充分考虑每一种影响因素,但实际上很难做到,一般尽可能地选择佳反应条件和佳操作步骤。 取材和固定  固定能明显影响酶活性,但固定使细胞膜的通透性发生改变,有利于底物和捕捉剂的渗透,也有利于形态结构的保存。固定方法按样品来源确定。酶对任何一种固定液都是敏感的,如果因固定而很快丧失活性(如琥珀酸脱氢酶),那么只能用不固定的标本。但不固定标本酶活性过高时,会出现反应产物过剩,或者由于酶往往是水溶性的,容易产生酶本身的扩散移位,使酶活性不正确地分布。所以一般均用固定标本进行酶细胞化学研究。固定的程度按酶的耐受性确定,对于那些耐受固定的酶也不能过度固定,一般固定程序是,在切片的孵育时间为15—30min左右时,尚能检出酶的活性为宜。   一般实验动物常用灌注固定,手术标本等用浸泡固定,其中血管或心脏灌注固定的效果要比浸泡固定好。浸泡固定的主要缺点是固定剂穿透慢,会导致组织深部固定不好,而且固定时间较长会使酶活性丧失。血管或心脏灌注固定速度快,固定均匀,固定时间易控制,因此在保存酶活性和保存超微结构两方面部比浸泡固定优越。但对于无法用灌注固定的标本(如手术标本)则用浸泡固定。在进行大批功能性动物实验时,几组动物需控制相同的酶反应条件,灌注固定操作时间较长,无法做到使几组实验动物同时取材、同时固定,并保证固定条件基本一致,这时一般只能用浸泡固定。

 


 
 
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