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一般透射电镜观察标本,需将细胞切成50一70mm切片 |
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一般透射电镜观察的标本,要求将细胞切成50一70mm切片 切片 一般透射电镜观察的标本,要求将细胞切成50一70mm的薄片,即超薄切片。切片前需对标本块进行修整,去除周围多余的包埋剂与不必要的部分,使样品形状与大小适于切片,并且使其硬度一致。目前常用LKB修块机进行机械修整. 超薄切片常用的刀片是玻璃刀,有时亦用钻石刀。制作玻璃刀的玻璃要求干净,质硬,含硅量在72%~了5gb,制刀时用LKB7800型制刀机将玻璃条切割成3mmX 3mm的正方形或3mmX 4mm的长方形玻璃块,召在近乎对角的部位切开,形成三角形的玻璃刀。制成的玻璃刀,必须进行质量检查才能使用。检查的方法可借助于切片机的双筒硬度计来进行。一把好的刀,其刀刃可见到一条弯曲平滑的应力线,从左侧刀角开始向右逐渐弯曲。在应力线起始处上方的刀刃占全长的1/5一l/3是超薄切片的部位。 为利于把切片收集到带膜的载网上和避免发生皱纹,需在玻璃刀上制备水槽,受纳切好的标本。可用黑色或银色的塑料粘性绝缘胶带粘于制成的玻璃刀上,底面与刀背垂直,顶端不高于刀刃,横断面不突出于刀背之外,再用熔化石蜡封闭胶带与玻璃的结合部位,形成一个不漏水的小槽,用注射器将蒸馏水滴入槽内,直至刀刃被浸湿为止。 切片一般用LKB超簿切片机切片,厚度由加热器的电流决定,切速为2、5、10、20mm/h时,切片周期固定为4s。切片时,先将标本夹在切片机臂上,再将玻璃刀夹紧,并与刀座上的标尺高度相等,移动硬度计,使之能见到标本块,再使玻璃刀向前推进,把标本中心对准刀刃的好部位,开动切片机即可切片。
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