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| 微粒体细胞超微结构层析透射式电子硬度计 |
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微粒体细胞超微结构透射式电子硬度计常用于细胞特异物质(如抗原)的定位，方法是将细胞与铁蛋白标记的抗体共同孵育，然后经染色、包埋、超薄切片，在透射电镜下铁蛋白形成高电子密度颗粒，可以精确地、特异性地显示出相应抗原的部位、分布。用铁蛋白标记配体，还可研究、显示膜受体。但由于铁标记较单一，现已不常用。在金属标记中现用得较多的是胶体金标记。胶体金标记技术是显示细胞中某种特殊物质结构的技术，胶体金为一种带负电荷的疏水胶体溶液，由吸附的周围离子云维持胶体的稳定性。胶体金标记有直接法和问接法两种，直接法是金标记物直接标记细胞结构；间接法是标本先用抗体血清处理后，再用金标蛋白A或金标第二抗血清处理。蛋白A(protein A)是从金黄色葡萄球菌分离出来的一种蛋白质，具有结合免疫球蛋白的功能。胶体金标记可用于光镜，也可用于电镜，包括透射式电镜和扫描电镜。 细胞离体成分的分析是将细胞破碎，取其某种细胞器或针对某一化学成分进行分析。例如，破碎细胞通过梯度离心分离线粒体，在体外可测定ATP的合成及分解功能。细胞中的内质网经分离出细胞后可形成囊泡，称为微粒体，其中包括各种酶成分，对这些酶成分的分析有利于对内质网功能的研究。对细胞化学成分的分析方法很多，如蛋白质分析就有层析法、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳等。层析法又有多种，常用的有柱层析，方法是使蛋白质混合液通过含有多孔固体基质的柱，不同的蛋白质与基质相互作用而被不同程度的滞留，当其从柱底流出时，即可被分别收集。选择不同的基质，就可根据蛋白质的电荷、分子量大小或特殊化学基团的结合力而分离出不同生物活性的蛋白质。sDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的方法，SDS为带负电荷的去垢剂，即十二烷基硫酸钠。它可以使蛋白质展开成为伸展的多肽链，并与其他蛋白质或脂质失去联系。这样在聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，就可使复杂的蛋白质混合物被分离成一系列按分子量大小依次排列的区带，很容易进行鉴别分析。细胞器的分离和提纯是为了更好地研究细胞超微结构的化学组成和生命活动。细胞器的分离常采用差速离心法，即首先将细胞破碎，然后在低温和适当pH条件下用不同转速的离心机将细胞的各种成分分开。如低速(1000r／min)短时间(15min)离心可首先将较大的细胞核沉淀下来，用高速(8000～25000r／min)离心可使次大的线粒体分离，再用超速(25000～8500°F／min)离心，可收集溶酶体等封闭小泡以及核糖体。差速离心不易得到纯净的细胞器和组分，其中常混有膜和一些颗粒结构。
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