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免疫荧光荧光硬度计技术在细胞生物学领域的应用 |
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免疫荧光荧光硬度计技术在细胞生物学领域的应用 免疫荧光染色技术,它可能是目前应用荧光硬度计多的技术。荧光团标记抗体可作为敏感而特异的探针,来标记固定细胞和/或通透性细胞内的抗原,并能定位特定的蛋白质。若用不同荧光团标记两个或更多抗体,并用它们来染细胞的话,则同时可见多种蛋白质的分布。本单元讲述固定细胞与细胞染色的基本方法,以及发现并解决潜在问题的技巧。 随着选择性标记细胞内细胞器的荧光染料的发现,荧光硬度计又多了一个用途,即用来检测活体内特定细胞分子的空间分布。用选择性荧光探针标记三种细胞器(内质网、高尔基复合体与线粒体)的方法, 另一个较好的成像系统为共聚焦硬度计,它能收集标本内薄聚焦面上的光线而清晰成像。 共聚焦硬度计在细胞生物学领域的应用;详述如何实现共聚焦光切片及如何重建标本的三维图像;也谈到了不同类型的共聚焦硬度计系统(包括激光扫描、快速扫描及双光子)及其优缺点,并提供一些建议,便于该仪器的使用。 采用免疫过氧化酶法定位细胞内抗原。采用这种方法,在光学硬度计及电子显微下均能检测蛋白质的分布,进而了解不同放大倍数的细胞组织情况。本单元涉及一些关于确保抗体进入抗原所在的细胞内位置、保持抗原特性以及在固定与染色过程中维持较好的细胞形态的技巧。另外,也谈到了免疫过氧化物酶染色的优缺点以及确保其成功的操作技巧。
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