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| 视频光学倒置荧光硬度计-细胞器的超微结构检测 |
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视频光学倒置荧光硬度计-细胞器的超微结构检测相关的视频光学／电子硬度计术基本方案 相关的视频光学／电子硬度计术 这种方法采用免疫金染色法和免疫过氧化物酶染色法来做电镜标本的染色 通常免疫金染色法常用来标记绝大部分抗原；而免疫过氧化物酶染色法通常仅用来标记那些位于膜包被的小间隔内的抗原，这是因为过氧化物酶反应生成的电子致密产物易从抗体结合处弥散开。只有采用免疫金染色法才能标记位于胞质内的GFP融合蛋白质的抗原决定簇。此外，HRP(辣根过氧化物酶)标记也适用于其他的抗原决定簇。 值得一提的是，许多用免疫荧光显示结果非常好的抗体在免疫源性电镜染色中不甚理想，因为在多数电镜标本的固定过程中用到的戊二醛很容易与抗原决定簇中的氨基酸基团桥联到一起；然而，若是减少或者不用戊二醛会造成细胞内细胞器的超微结构无法很好保存。如果免疫源性电镜标记行不通，可以采用一些调节手段 将培养皿放于倒置荧光硬度计下，选择一个转染的目的细胞，确定其在细胞定位栅 格坐标上的相对位置，并在细胞定位栅格图上绘出(照出)其位置。 用多光子硬度计、激光扫描共焦硬度计或者数码荧光倒置硬度计(通过计算机能获得一系列时延性图像)来观察选择的活细胞内GFP标记结构的动态变化。 在摄取图像的过程中，如果有感兴趣的图像，则向细胞培养基中加入固定剂A(细胞培养基／固定剂A一1：1)。 停止摄取影像，细胞在固定剂A内放置5～10min。如果需要，继续摄取一系列细胞影像。
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