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直接计数硬度计观察细胞数量-生物图像硬度计 |
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直接计数硬度计观察细胞数量-生物图像硬度计 长期以来,革兰氏染色法一直是用于微生物观察制样的常用方法。将少量的样品(约10μL)涂抹在硬度计载薄片中直径约1.5cm圆形区域上。然后通过文火加热来热固定或通空气来干燥载薄片上的液滴。通过一系列的着色和清洗步骤,该涂片用碘制剂染色、脱色,然后用一种非特异番红精再次染色。因为碘与碳水化合物反应变成紫色,通过硬度计观察,革兰氏阳性细胞呈现紫罗兰至紫色。革兰氏阴性细胞因为被其LPS外包膜覆盖,不会保留碘的染色效果。相反,它们保留了由非特异染色(番红精)赋予的粉红色。 随着对分枝杆菌和HP可能存在关系的担忧的不断增加,已经使得金属加工液系统利益相关者关心抗酸性染色。分枝杆菌和放线菌细胞包膜有典型的高脂肪含量。因此,当它们被酚品红液染料染色后,通过光学硬度计观察它们呈现红色 直接定量计数法利用专门的计数池,将液体样品压缩成薄膜,覆盖在一个校准的栅格里。另外,细胞也可以浓缩到一个过滤膜上。细胞或者被事先染色(和对AFB的计数的操作相同),或用相衬光学显现。分析人员数每个硬度计区域的细胞数量(通过硬度计观察的圆形可见区域),计算每个区域的平均细胞数,然后根据预先确定的区域尺寸,计算每毫升样品中的细胞量。 直接计数法的优势在于无需因方便观察而进行的微生物增殖。然而,多数直接计数法不能区分取样时活细胞和死细胞。假设样品体积和硬度计可视表面积很小,直接计数检测检出限度大约是2×10的6次方细胞/mL的样品。直接计数工作量大,并且需要一定的专业技能。
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