实验流程：
*.开冷气，开风扇，开冷却器。

1.将汞灯打开，将硬度计总灯源打开。
2.打开scanner，打开电脑电源。
3.开启Ar雷射风扇，开启雷射，He-Ne雷射旋钮右扳至start即可，Ar雷射开启方式，要将旋钮转到3点锺方向，再转回start，而亮灯开启表示开启成功。再调整Ar雷射强度，转至12点锺，不要调整到max，会使萤光很容易被分解。

4.启动软体。
5.将样品放好，滴上油，调整镜头，63/1.32/oil。
6.观察样品应注意事项：A.将光路控制杆推入VIS位置。B.将萤光滤镜调控至1or2or3的位置。(1:UV灯，2.FITC萤光滤镜，3.rhodamine萤光滤镜)。C.将tube lens转到1.0X的位置。D.打开UV灯，推下杆钮(0的位置)。

7.先以快速上升钮，调控上升载物台，再将接近物镜时，就小心缓慢的调整上升钮，会发现绿光会渐渐变暗，等绿光突然变亮，表示镜头已经接触到油滴，此时改转动细调节轮。快速地朝自己的反向转动，转动后视野红色会变亮在变暗，此时表快接近目标，在继续转动看到目标为止。(寻找时利用FITC绿色灯激发，于目镜中看到红色的光。利用FITC寻找快)。看到后调整视野，至佳的状况。

8.将硬度计视野转至电脑，须注意事项：A: 将光路控制杆拉出。B.将萤光滤镜调控至4的位置。(4:电脑)。C.将tube lens转到UV scan的位置。D.关上UV灯，推上杆钮(1的位置)。

9.操作软体：
10.选用萤光感测光谱测定，在acquire中，按Beams，光线激发光(U-FITC-TRITC-1)选取好，按两下。大多使用user定的，不要去改leica内定的质，如果要自行设定条件及一各专属的应用档名，则按save，输入档名即可。选取设定的PMT，选取Glow(O):讯号感测超过阀值，会警示与变蓝色，其馀为灰阶设定。

11.设定和确定基本扫描参数[obj]>物镜的倍数：PL-APO 63x/1.32/oil，[mode]>扫描模式：xyz，[format]>选512*512，[speed]>扫描速度：400Hz，[pinh]>选Airy1，[zoom]选取1，[8/12]选取8 bits。

12.完成上列基本设定后，即可开始执行连续扫描continuous scan，扫描后快速调整PMT感测的gain，以出现一点点蓝色为佳，也可以调整Z轴，调整焦距，让影像更清晰，完按stop。

*.除了PMT及Z-focus调整外，也可以调整雷射强度，光谱感测范围，或pinhole大小，或改变PMT的offset，调整后，可再按一次continuous scan，及可以储存影像。如果影像不够清晰或杂讯太多，则可以在使用average的撷取处理。

13.影像储存：将游标至于影像中，按右键，选sent to>experiment> >影像储存。再至暂存区，选取档案，至file指令中，选取save as。

14.影像average处理：调大 和 的值，2*2或4*4，值越大，越清晰。在按 ，扫完按stop，扫完在影像中按滑鼠右键，储存。

15.在影像调控显示视窗中，可以选取显示视窗，如果为ch-3，视窗为(FITC/TRITC/Cy5)，第四个ch显示区为3各视区的overlay。视窗颜色可以选取旁边的调色带，来更改颜色。

16.连续扫描：调整 *1， *1，按 ，调整Z轴，按 ，调整Z轴，按 。按 看厚度，按 选取切片次数(1.2μm/次)。关掉 ，调整 *2， *2，按 。扫完影像后，可以以play连续观看，或 观看所有影像，或以 选取好的影像，也可以用旁边的调色带调整影像，完成后，在影像中按滑鼠右键，储存。储存完后选取再按file储存。）

17.关机：调整Ar雷射左调至min小处。关闭He-Ne雷射，关闭Ar雷射至off。关闭扫描器电源，结束软体，关闭电脑电源，Ar雷射电扇不要关，关掉硬度计灯源(汞灯，卤素灯)，关闭硬度计总电源开关，擦镜头，将镜头转至空镜头，关闭实验室总电源。